科研实验
生物实验室洁净实验室微生物检测
洁净室(区)微生物可检测沉降菌或浮游菌。沉降菌检测是通过自然沉降原理,收集空气中的生物粒子于培养基平皿中,经若干时间,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。浮游菌的检测是采用计数浓度法,即通过收集悬浮在空气中生物粒子于专门的培养基,经若干时间,在适宜的生长条件下其繁殖到可见的菌落进行计数,从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数,以此来评定洁净室(区)的洁净度。实际检测浮游菌和沉降菌时,先确认洁净室(区)的检测条件能否达到级别要求。达到要求后,测试人员和检测仪器等按洁净室(区)的进出规定(如穿戴符合环境级别的工作服、紫外照射、仪器外体消毒等)进出洁净实验室(区),测试人员先测量测试区域的面积和体积,确定采样次数和采样点。浮游菌确定采样量后按仪器操作规程操作,把空气中悬浮的微生物采集到肉汤琼脂培养基上。沉降菌确定采样时间后直接把培养基裸露在空气中,让空气中的微生物自动降落在肉汤琼脂培养基上。采样要点见表4~7。采集完的培养基需在30℃~35℃培养箱中培养,时间≥48h。同时选定不少于3只培养基作空白对照培养。
微生物检测时需注意:
1.检测前应仔细检查每个培养皿的质量,不能使用有变质、破损或污染的培养基和培养皿。
2.采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。
3.对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
5.若在本实验室以外的环境中进行检测,则培养基在整个运输过程中必须对温度进行控制,培养基需放在含有冰块的、消毒过的运输箱内,温度控制在0℃~4℃,并在记录中记录运输温度。
表4 洁净室(区)浮游菌的检测要点1.检测前应仔细检查每个培养皿的质量,不能使用有变质、破损或污染的培养基和培养皿。
2.采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。
3.对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
5.若在本实验室以外的环境中进行检测,则培养基在整个运输过程中必须对温度进行控制,培养基需放在含有冰块的、消毒过的运输箱内,温度控制在0℃~4℃,并在记录中记录运输温度。
参数指标 | 浮游菌 |
检测依据 | JGJ71-90、GB/T16293-1996[3] |
检测条件 |
1. 风速或换气次数和静压差达到级别要求,温、湿度须达到规定的要求。 2. 浮游菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。 3.对单向流,如100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行≥10min后开始。 4.对非单向流,如10 000级,100 000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行≥30 min后开始。 |
采 样 点 位 置 |
1.测点位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。 2.送风口测点位置离开送风面30cm左右。 3.可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。 |
采样点数目和次数 |
浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况,见表5。每个采样点一般采样一次。 1)对每个100级洁净操作区域(如层流罩、层流工作台),可在离药物敞开口处30cm处设测点,每班一次。 2)对每个10 000级洁净工作区域(如药物开口工作区),可在工作面处设测点,每班一次。 |
采 样 量 | 采样量根据日常监测及环境验证确定,每次最小采样量见表6。 |
结果报告 | 以检测区域的浮游菌最大菌落浓度(个/m3)进行报告。 |
面 积 m2 |
洁 净 度 级 别 | |||||
100 | 10 000 | 100 000或300 000 | ||||
验证 | 监测 | 验证 | 监测 | 验证 | 监测 | |
<10 | 2~3 | 1 | 2 | 1 | 2 | — |
≥10~<20 | 4 | 2 | 2 | 1 | 2 | — |
≥20~<40 | 8 | 3 | 2 | 1 | 2 | — |
≥40~<100 | 16 | 4 | 4 | 1 | 2 | — |
≥100~<200 | 40 | — | 10 | — | 3 | — |
≥200~<400 | 80 | — | 20 | — | 6 | — |
400 | 160 | — | 40 | — | 13 | — |
注:1)表1中的面积,对于100级的单向流洁净室(包括层流工作台),指的是送风口表面积,对于10 000级,100 000级,300 000级的非单向流洁净室,指的是房间面积。 2)日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定。 |
洁净度级别 | 采样量,L/次 | |
日常监测 | 环境验证 | |
100级 | 600 | 1 000 |
10 000级 | 400 | 500 |
100 000级 | 0 | 100 |
300 000级 | 0 | 100 |
表7 洁净室(区)沉降菌的检测要点
参数指标 | 沉降菌 |
检测依据 | JGJ71-90、GB/T16294-1996[4] |
检测条件 | 同浮游菌。 |
采样点位置 |
1.工作区采样点的位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。 2.可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 |
采样点数目 | 沉降法的最少采样点数可按表8确定。 |
采样量 | 应满足最少培养皿数,见表9。 |
结果报告 | 以检测区域的最大菌落数(个/皿)进行报告。 |
面 积m2 | 洁 净 度 级 别 | ||
100 | 10 000 | 100 000或300 000 | |
<10 | 2~3 | 2 | 2 |
≥~<20 | 4 | 2 | 2 |
≥~<40 | 8 | 2 | 2 |
≥40~<100 | 16 | 4 | 2 |
≥100~<200 | 40 | 10 | 3 |
≥200~<400 | 80 | 20 | 6 |
≥400~<1000 | 160 | 40 | 13 |
≥1 000~<2 000 | 400 | 100 | 32 |
2000 | 800 | 200 | 63 |
注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面面积;对非单向流洁净室,是指的房间面积。 |
洁净度级别 | 所需φ90mm培养皿数(以沉降0.5h 计) |
100 | 14 |
10 000 | 2 |
100 000或300 000 | 2 |
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